设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理。
如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,从而对基因的表达起抑制或增强的作用,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性:(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,荧光素酶与底物反应,如pgl3-basic等。(3) 加入特定的荧光素酶底物转录因子是一种具有特殊结构,也称为反式作用因子。荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段,这些特异性的序列被称为顺式作用元件、行使调控基因表达功能的蛋白质分子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合。(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报
已知某段DNA序列,如何设计实验得到该DNA可能具有的功能
1. 先做序列分析。看是编码序列还是非编码序列。如果是编码序列,则看所编码的蛋白质功能。非编码序列,到Google上搜promoter prediction。然后输入你的序列。可以推测该序列作为promoter的功能。 2. 证明就是要做实验了。ChIP是金标准。原理就是先固定活细胞,使DNA和其上所结合的蛋白发生交联。再用超声震荡是DNA-蛋白质复合体的大小到1K左右。然后用针对该蛋白的抗体做免疫沉淀。这样只有和该蛋白结合的DNA才会被一起沉淀下来。然后复性DNA。收集后做PCR。看是不是你要的那段序列。
要获得一个基因的单克隆抗体,怎样设计实验方案
下面是通过原核表达系统得到基因表达的产物以及制备多克隆抗体的一种方法: 1.得到目的基因:设计引物(引物上带有酶切位点)→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上 2.得到目的蛋白:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,摇菌过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21(DE3)菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
关于中学生物奥林匹克竞赛的不定项选择题的书
新华书店。《中学生奥林匹克竞赛试题全解——生物》。吉林人民出版社。我买过的。听好的 2006年湖南省中学生生物学奥林匹克竞赛选拔赛试题 考试时间:2006年4月23日上午9:00~11:00 试卷总分:120分 第1卷(本卷两大题,50小题,共70分) 一、单项选择题 下列各题都只有一个正确答案,请将其代号选填到答题卡中的相应空格内,每题1分,共40分。 1.下列各是某同学在观察植物某一器官的装片时,所画的四个细胞的图象。下列有关说法正确的是 A、d细胞属畸形分化 B.b细胞和c细胞都不可用于观察叶绿体运动 C.图中各细胞都通过渗透作用吸水 D.a细胞中染色体比其他细胞中清晰 2.在人体的血液
验证两蛋白的相互作用关系,要做哪些相关实验
蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。
一、酵母双杂交系统:酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测到报道基因的表达产物,则说明两者之间有相互作用,反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中,人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交